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    ELISA檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)確操作步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2015-01-19  點(diǎn)擊次數(shù): 1318次

    面對(duì)市場(chǎng)上種類越來(lái)越多的ELISA檢測(cè)試劑盒,人elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒、豬elisa試劑盒、羊elisa試劑盒等,再選擇的時(shí)候我們就有些眼花繚亂了。雖然每個(gè)ELISA試劑盒價(jià)格都不貴,但是如果使用不恰當(dāng)?shù)脑?,造成檢測(cè)結(jié)果出差錯(cuò)還是不好的。所以在使用ELISA檢測(cè)試劑盒做檢測(cè)的時(shí)候,步驟的準(zhǔn)確性真的是相當(dāng)重要的。以下先介紹一種簡(jiǎn)單的—間接法:

    1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;

    2.次日洗滌3次;

    3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;

    4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;

    5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

    6.zui后一遍用DDW洗滌。

    7.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

    8.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

    9.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

    如果按照以上的步驟用于ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的話,那么不論購(gòu)買的國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒還是進(jìn)口ELISA試劑盒的話,那么檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率都不低的。

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