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    完整的ELISA試劑盒

    發(fā)布時(shí)間: 2014-07-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1036次


    完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考尺度品和控制血清(定量測定中);酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;洗滌液;酶反應(yīng)終止液。ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。
    ELISA載體的外形主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機(jī)能好,空缺值低,孔底透明度高,各板之間、統(tǒng)一板各孔之間、統(tǒng)一板各孔之間機(jī)能相近。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài),因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為敏捷。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。 
    疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的前提下一般可保留6個月以上??勺鱁LISA中載體的材料良多,zui常用的是聚苯乙烯。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離,洗滌利便,ELISA試劑盒一般均配以特殊儀器。為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,可應(yīng)用如下的試驗(yàn):用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操縱步驟進(jìn)行測定,然后比較結(jié)果。小試管還可以當(dāng)作比色杯,zui后直接放入分光光度計(jì)中比色。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕捉包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的機(jī)能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍留存原來的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。控制反應(yīng)前提,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。例如,在檢測抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。換言之,包被等于抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。

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