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    ELISA試劑盒實驗操作

    發(fā)布時間: 2014-06-16  點擊次數(shù): 905次

    ELISA試劑盒實驗前準(zhǔn)備
    1.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
    2.準(zhǔn)備各種實驗儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等
    3.濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
    4.濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
    5.用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)

    ELISA試劑盒操作步驟
    1.取出酶標(biāo)板,設(shè)空白孔,依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品,用醫(yī)用蒸餾水替代)
    2、分別標(biāo)記樣品編號,加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。
    3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘;
    4、將酶標(biāo)板板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體;
    5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    6、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。
    8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。
    9、將酶標(biāo)板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體。
    10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    11、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    12、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。(A液、B液采用不同的吸頭加樣)
    13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。
    14、每個微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻。
    15、在酶標(biāo)儀上,450nm處測定OD; 顯色后,15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定。
    16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣本含量
    ELISA試劑盒注意事項
    1.  此試劑為體外檢測試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號的試劑不能混用。
    2.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,
    3.濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘。
    4.濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘
    5.若24小時內(nèi)進(jìn)行實驗,標(biāo)本可存放于2~8℃。不需及時實驗,標(biāo)本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
    6.在反復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低度,造成吸光度偏離的假像。
    7.加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。
    8.試劑盒保存于2~8℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。

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