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    腫瘤壞死因子ELISA試劑盒的細(xì)節(jié)處理

    發(fā)布時間: 2016-06-02  點擊次數(shù): 1008次

        由于腫瘤壞死因子ELISA試劑盒只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了保證檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。另外,還應(yīng)保證樣本不含NaN3,因為NaN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。
        細(xì)胞裂解液的細(xì)節(jié)處理:
        1. 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
        2. 收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
        3. 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的     細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
        4. 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
        5. 4℃10000×g離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
       ·腫瘤壞死因子ELISA試劑盒組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理:
        1. 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
        2. 將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分
        3. 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。
        4. 吸取勻漿液到離心管,4℃5000×g離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

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