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    小鼠ELISA試劑盒操作時的室溫

    發(fā)布時間: 2015-12-15  點擊次數(shù): 2485次

        在小鼠ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。
        只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。 
    溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立小鼠ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反應(yīng)4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。
        保溫的方式除有的小鼠ELISA試劑盒儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,小鼠ELISA試劑盒板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將小鼠ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應(yīng)板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,小鼠ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

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