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    ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理分析管理

    發(fā)布時(shí)間: 2015-03-24  點(diǎn)擊次數(shù): 2350次

        Engvall 和Perlmann于1971年應(yīng)用將酶附著于抗原或者抗體,通過(guò)化學(xué)反應(yīng)的測(cè)定終產(chǎn)物顏色的方法進(jìn)行了IgG的定量測(cè)定,并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"也就是我們所說(shuō)的即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),這種固相酶免疫測(cè)定方法已經(jīng)在科研領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。

        ELISA檢測(cè)試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,具有靈敏度高,操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),但是在具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中影響因素較多,并且要按照嚴(yán)格的說(shuō)明要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果)。

        引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。
    (1)類風(fēng)濕因子
    人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。ELISA檢測(cè)試劑盒解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);③檢測(cè)抗原時(shí),可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。
    (2)補(bǔ)體
    ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q 可以將二者連接起來(lái),從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
    (3)嗜異性抗體
    人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái),也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。
    (4)嗜靶抗原的自身抗體
    抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
    (5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s) 抗體
    臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是:測(cè)定抗原時(shí),在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig (s) ,從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
    (6)交叉反應(yīng)物質(zhì)
    類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí),如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí),也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
    (7)標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等,ELISA檢測(cè)試劑盒均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。

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