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    上海研域生物操作ELISA試劑盒時,實驗室需求留意這幾點(diǎn)

    發(fā)布時間: 2024-02-18  點(diǎn)擊次數(shù): 750次

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    實驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制實驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以確保實驗作用的準(zhǔn)確性。有時本底較高,闡明有非特異性反應(yīng),可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

    ELISA試劑盒


     上海研域生物在ELISA試劑盒當(dāng)中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其間包含:

    1. 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等?,F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在運(yùn)用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),調(diào)查其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附功能是否良好。

    2. 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它實驗條件相一同,調(diào)查陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說一般為1~10μg/ml。

    3. 酶符號抗體作業(yè)濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法"(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度。 

    4. 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。ELISA試劑盒底物作用一段時間后,應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反應(yīng)。一般底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液有必要新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前參與。 

     

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