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    檢測(cè)植物elisa試劑盒操作步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2021-09-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1873次

    檢測(cè)植物試劑盒操作步驟:

    1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

    2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

    3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

    4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

    7.溫育:操作同 3。

    8.洗滌:操作同 5。

    9.顯色:每孔先加入顯色劑 a50μl,再加入顯色劑 b50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.

    10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

    11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(od 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。


    8.jpg


    計(jì)算和結(jié)果判定:

    試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00 陰性對(duì)照平均值≤0.10

    臨界值(cut off)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值 0.15

    陰性判定:樣品 od 值< 臨界值(cut off)者為金葡萄球菌腸毒素(se)陰性 陽(yáng)性判定:樣品 od 值≥ 臨界值(cut off)者為金葡萄球菌腸毒素(se)陽(yáng)性。

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