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    我司詳述ELISA實(shí)驗(yàn)失敗之后的解決方案

    發(fā)布時(shí)間: 2020-10-14  點(diǎn)擊次數(shù): 1760次

    一:試劑因素

    1. 首先試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。ELISA試劑盒不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。

    2. 由于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)有差異,還有抗體、檢測(cè)方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會(huì)導(dǎo)致對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果不一致。

    如:有的廠家酶標(biāo)板孔間CV值大于20%,標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差,使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽(yáng)性或假陰性。

    3. 要注意試劑的批號(hào)和出廠日期,雖然試劑的有效期多為1年,選擇剛出廠的試劑盒。避免選擇假的ELISA試劑盒。有些廠家為夸大生產(chǎn)ELISA的指標(biāo)范圍,用一種指標(biāo)來(lái)冒充其它指標(biāo),造成各種種屬、各種指標(biāo)都可以做的假象。

    4. 比如用TGF beta這樣的指標(biāo)代替大多數(shù)試劑盒的其它指標(biāo)作為檢測(cè)抗體,同樣可以獲得良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)門GF beta在大多數(shù)哺乳動(dòng)物中都有廣泛表達(dá),種屬間的氨基酸序列同源性達(dá)100%,TGF beta隨著其他因子的影響,其表達(dá)水平也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化,使得實(shí)驗(yàn)者難以查覺(jué)。

     

    在分析完以上可能出現(xiàn)的因素后,專家給到以下鑒別方法,大家可以直接去搜索如何鑒別真假ELISA試劑盒。

    1.利用干擾實(shí)驗(yàn)可辨別ELISA試劑盒是否檢測(cè)目的抗原。

    2.如果購(gòu)買了同一公司的ELISA試劑盒A和B,利用交叉實(shí)驗(yàn)可辨別ELISA試劑盒真?zhèn)巍?/p>

    3.指標(biāo)本身也可以鑒定試劑盒的真?zhèn)巍?/p>

    2.標(biāo)本因素和操作因素

    血清是常用的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:

     

    二:內(nèi)源性物質(zhì)

    有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),ELISA試劑盒可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

     

    三:外源性物質(zhì)

    外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過(guò)久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。

    所以,當(dāng)ELISA測(cè)定結(jié)果與預(yù)期或文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中不一致時(shí),應(yīng)該首先考慮試劑因素,這個(gè)是做好實(shí)驗(yàn)獲得正確數(shù)據(jù)的前提保證,其次還有標(biāo)本因素和操作因素等多方面進(jìn)行分析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,從而為實(shí)驗(yàn)提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。

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