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    單克隆抗體時動物的選擇與免疫

    發(fā)布時間: 2011-05-26  點(diǎn)擊次數(shù): 1680次

    單克隆抗體時動物的選擇與免疫

    一、免疫
    一般而言,抗原的純度不很重要,特別是免疫原性較強(qiáng)的抗原。免疫程序、劑量和方法是關(guān)系到是否能得到所需要的單抗體的關(guān)鍵之一。正常小鼠脾臟含有能產(chǎn)生各種不同抗體的B淋巴細(xì)胞,一只純種小白鼠估計能產(chǎn)生1.0×107~5.0×107種不同的抗體。因此一只正常的小白鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤融合,只能有千萬分之一的機(jī)會獲得某一種特定抗體。所以為了提高得到某種雜交瘤的機(jī)會,必須加強(qiáng)免疫,使產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞大量增加。B淋巴細(xì)胞的不同發(fā)育階段對獲得陽性雜交瘤也有很大影響。有人認(rèn)為處在轉(zhuǎn)化時期的B淋巴細(xì)胞可能更易于融合,而免疫以后7~8天,雖然是抗體產(chǎn)生的高峰時期,但形成有活力的雜交瘤細(xì)胞的可能反而減少。故一般認(rèn)為加強(qiáng)免疫后的第三天應(yīng)殺鼠取脾做細(xì)胞融合。
    1. 可溶性抗原(蛋白質(zhì)) 以1mg/ml~5mg/ml的溶液加等量的弗氏*佐劑乳化,分多點(diǎn)小鼠皮下注射,總量為0.3ml~0.6ml,間隔3-5周再同樣注射一次,10天后,斷尾取血一滴,測抗體效價,選滴度高的小鼠做融合試驗。一個月后可以經(jīng)靜脈(尾靜脈)給予無佐劑抗原0.2ml~0.4ml,3~4天后,殺死小鼠取脾做融合用。 
    2. 顆粒性抗原 如抗原來源方便,可以不加佐劑而增加免疫次數(shù),縮短間隔時間。例如用羊紅血球免疫小白鼠,以1%濃度每只皮下注射0.2ml,每周2次,共免疫5-8次,取脾前3天,再免疫一次即可。有人認(rèn)為zui后一次免疫劑量要大,大到近于免疫耐受的程度更好。
     

    二、動物的選擇
    目前應(yīng)用zui廣的是小白鼠和大白鼠,尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應(yīng)用zui廣,因為所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘導(dǎo)出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的,雌雄均可,以8~12周齡為宜。大白鼠也可,能產(chǎn)生較多量的單抗體?,F(xiàn)在已經(jīng)在小鼠雜交瘤的基礎(chǔ)上,發(fā)展了小鼠-大鼠,小鼠-人以及人-人雜交瘤技術(shù)。
     

     

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