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    雙抗夾心ELISA試劑盒的反應(yīng)時(shí)間

    發(fā)布時(shí)間: 2019-02-27  點(diǎn)擊次數(shù): 1429次

       在保證 ELISA 有效檢測(cè)病原菌的前提下,快速方便也是雙抗夾心ELISA的必要條件。雙抗夾心ELISA從加入待測(cè)抗原到得出結(jié)果,檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 共需要5h左右,而間接ELISA則需要7h(包被 37℃,2h)或 者 17h(包被 4℃guo夜)。本論文篩選出的雙抗夾心ELISA檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 省去封閉這一步驟。在間接ELISA測(cè)定抗原中,封閉一般是*的,因?yàn)榘徊煌瑵舛瓤乖灰欢梢?覆蓋固相載體表面,如果不封閉,很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗直接被吸附到固相載體上,產(chǎn)生非特異性顯色而使檢測(cè)結(jié)果偏高。但是對(duì)于雙抗體夾心ELISA來(lái)說(shuō),在包被捕獲抗體時(shí)已經(jīng)使固相載體飽和,已經(jīng)沒(méi)有多余的吸附力來(lái)吸附隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗,這都說(shuō)明 了雙抗夾心ELISA有不需要封閉的可能,通過(guò)正交試驗(yàn)結(jié)果也證明不封閉可以達(dá)到理想實(shí)驗(yàn)效果,而且還縮短了整個(gè)檢測(cè)流程和時(shí)間,說(shuō)明只要酶標(biāo)記物是高活性的 并且操作時(shí)洗滌*,不經(jīng)封閉也可得到滿(mǎn)意結(jié)果。雙抗夾心ELISA檢測(cè)法的特異性和靈敏性抗原抗體的結(jié)合實(shí)際上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間,由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系,所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特 異性。但這種特異性并不是的,假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu),在抗原抗體反應(yīng)中可能出現(xiàn)交叉 反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌 O157:H7 及其他菌株共 10 株作 為抗原用來(lái)檢測(cè)本方法的特異性,結(jié)果顯示大腸桿菌 O157:H7 呈明顯陽(yáng)性反應(yīng),其余各菌株均呈陰性反應(yīng), 說(shuō)明本方法對(duì)大腸桿菌 O157:H7 具有明顯的檢測(cè)特異 性,而對(duì)所測(cè)定的其它菌株無(wú)交叉反應(yīng)。

       本論文所建立的雙抗夾心ELISA方法對(duì)純培養(yǎng)的 大腸桿菌O157:H7檢出限均105CFU/ml,Kerr 和 Chart 等[6]建立的雙抗夾心 ELISA 檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7 的檢測(cè)限為 10 5 CFU/ml ,建立的雙抗夾心ELISA 檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7的檢測(cè)限為 104CFU/ml,兩者均用單克隆抗體作為檢測(cè)抗體,而本方法使用IgY 抗體與兔多克隆抗體,制備相對(duì)比單克隆抗體簡(jiǎn)單,對(duì)試劑成本要求也相對(duì)降低,其效果基本達(dá)到檢測(cè)要求。

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