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    Elisa實驗中血清的采集及注意事項

    發(fā)布時間: 2018-11-09  點擊次數(shù): 2154次

    ELISA試劑盒實驗中,對于采集血清經(jīng)常碰到很多問題:

    1、標(biāo)本采集后什么時候開始離心,有說采集半小時后離心的,還有說采集全血后在4℃過夜,再離心,如果采集后7-8小時再離心可以嗎?

    2、離心時多少轉(zhuǎn)、離心幾分鐘比較合適

    血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來,在5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。

    實驗中,標(biāo)本離心越早越好,但多數(shù)標(biāo)本要30分鐘后才凝集完畢,離心時間在2小時內(nèi)完成,(尤其生化)時間太長血液中的細(xì)胞成分會分解血漿中有機成分,離子也會發(fā)生轉(zhuǎn)移造成誤差;4度冷藏雖能降低紅細(xì)胞活性但細(xì)胞還會進(jìn)行緩慢無氧酵解,血糖會明顯減低,冷藏時需分離血清儲存;對于酶免試驗影響較小,但時間太長也會引起偏差如蛋白質(zhì)變性,水分蒸發(fā)造成誤差離心速度一般要求1500~3000轉(zhuǎn)之間(25000轉(zhuǎn)),離心速度低會離心不*,速度過快容易溶血,一般離心5~15分鐘即可(約10分鐘)。

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