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    ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子知多少

    發(fā)布時(shí)間: 2018-04-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1393次

    從21世紀(jì)初期,ELISA試劑盒由于免疫學(xué)研究中一個(gè)非?;钴S的領(lǐng)域就是細(xì)胞因子的研究,它的檢測(cè)成為現(xiàn)代生物科學(xué)研究的重要方面。國(guó)內(nèi)的生物廠家,運(yùn)用抗原、抗體反應(yīng)的原理已研制出了高靈敏度(sensitive)、高特異性、高度配套的細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒,生產(chǎn)的檢測(cè)試劑盒涵蓋幾乎所有的細(xì)胞因子。依據(jù)檢測(cè)方法不同,可分為ELISA測(cè)定(酶聯(lián)免疫)和放射免疫測(cè)定。
    1. 放射免疫測(cè)定
    放射免疫測(cè)定是將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合,方法大多采用競(jìng)爭(zhēng)法原理。待檢的細(xì)胞因子與放射性同位素標(biāo)記的細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)與細(xì)胞因子抗體(多克隆抗體或單克隆抗體)結(jié)合,再通過分離劑分離結(jié)合狀態(tài)的標(biāo)記物,計(jì)數(shù)后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出細(xì)胞因子的量。本法具有靈敏度高(可檢測(cè)出ng甚至pg水平),特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。
    2.ELISA測(cè)定
    2-1.
    酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(ELISPOT) 檢測(cè)試劑盒是基于定量夾心ELISA法原理,將刺激后的細(xì)胞滴加到包被在貼PVDF微孔中,放置于37℃孵育。在孵育的過程中,細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子即會(huì)被包被的抗體所捕獲,以下的過程與一般的ELISA實(shí)驗(yàn)相同,zui后用不溶性的酶聯(lián)底物進(jìn)行顯色,每一個(gè)顯色點(diǎn)(斑點(diǎn))既代表一個(gè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞。通過的ELISPOT分析儀或在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù),就可以進(jìn)行分析。ELISPOT法用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,綜合了普通ELISA方法的高特異性和準(zhǔn)確定量的優(yōu)點(diǎn),而且具有生物活性分析得出與功能相關(guān)的結(jié)果的優(yōu)點(diǎn)。
    2-2.
    ELISA試劑盒雙抗夾心ELISA法 雙抗體夾心法需制備針對(duì)細(xì)胞因子不同位點(diǎn)的兩個(gè)單克隆抗體,一個(gè)抗體作為固相抗體用于包被,另一個(gè)作為標(biāo)記抗體。可采用常規(guī)雙抗夾心法,也可采用一步法。由于血清中細(xì)胞因子的含量很低。常規(guī)ELISA法不能滿足要求,需引入生物素-親合素系統(tǒng)來提高靈敏度,即加入樣品后加入生物素標(biāo)記的另一個(gè)抗體,再加入親合素及生物素化的酶,再加入底物進(jìn)行顯色,顏色與待檢的細(xì)胞因子量呈正比。

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